C3荧光定量PCR仪操作规程

时间:2017-11-08浏览:304设置


  1. 打开电脑和仪器的电源开关,待仪器电源显示power绿色状态。

  2. 双击电脑桌面上的“7500 software v2 0 5”图标,启动软件程序,单击“OK”选项,进入软件连接仪器和测试校准状态(若连接失败,则检查USB连接接口)。

  3. 点击“Advanced Setup”图标,进入高级设置SetupExperiment Properties界面,具体设置步骤如下:

    1. 输入实验名称(Experiment Name);

    2. 选择仪器型号(通常为7500 (96 wells));

    3. 选择试剂类型(通常为SYBR@ Green Reagents);

    4. 选择反应程序类型(通常为Quantitation-Comparative CT (∆ ∆CT) );

    5. 选择运行模式(通常为默认)

  1. 进入SetupPlate Setup界面,设置基因(Target)及样本(Sample):

      1. 1)“Add New Target”和“Add New Sample”选项,添加并编辑基因名称和样品名称;

      2. 2)“Reporter”和“Quencher”选项选择荧光基团和猝灭基团(通常选择的是FAMnone);

      3. 3)进行样品板排布,利用鼠标单选或拖曳以选择反应孔,然后勾选基因及样本,同时在Task选项中指定该反应孔的类型;

      4. 4)在“Select Relative Quantitation Settings”选项中选择对照样本及内参基因。

  2. 进入SetupRun Method界面,设定反应程序和反应体系(选择保存运行的模板,命名。下次实验使用的时候就不用再在设条件,直接点击open run method,调出你所需要做的实验的扩增条件)。

  3. Reaction setup(反应体系设置)和Materials list(耗材清单)不需要设置。

  4. 进入SetupRun界面,点击“Run”绿色按钮选项,根据提示保存实验文件后开始运行程序。

  5. 程序运行结束后,在左侧会出现对数图谱形式的实时的曲线图谱,若想换为线性图谱,选择loglinear,再点击右上角绿色分析按钮,样本的结果会在右边的96孔面板中出现,最后进行曲线的基线baseline跟阈值threshold设置。

  6. 点击顶端“Export”选项,导出数据。


返回原图
/

Baidu
sogou